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技術(shù)支持

共焦拉曼顯微鏡在生物樣品中的應(yīng)用
更新時(shí)間:2018-12-28   點(diǎn)擊次數(shù):1916次
我們這里有做生物樣品的共焦拉曼顯微鏡的,在獲得的圖里面有很強(qiáng)的熒光,有的說,如果拉曼得不到就用其熒光譜??晌蚁雴栆幌?,在拉曼譜里面得到的熒光背景,是真正的熒光特征譜嗎?這和熒光光譜儀里面的熒光圖有什么區(qū)別?
1. 原則上說,拉曼譜中的熒光和熒光譜中的熒光是一樣的,只要激發(fā)波長和功率密度相同。注意橫坐標(biāo)要從波數(shù)變換為納米,即用10000000nm(1cm)除以波數(shù)就行了。但有一點(diǎn)要注意,不同波長的激發(fā)光照射樣品,得到的拉曼相近,但熒光可以有很大不同,甚至相同波長不同功率激發(fā),熒光譜都大不一樣。
2. “注意橫坐標(biāo)要從波數(shù)變換為納米,即用10000000nm(1cm)除以波數(shù)就行了”?
Raman測定的是散射光,得到的是Raman shift. Raman shift和波長(熒光光譜)之間要一個(gè)轉(zhuǎn)換的吧。
3. 生物樣品一般熒光峰比較寬,用熒光光測試之前一般先會(huì)做儀器本身曲線校正也就是儀器本身的響應(yīng)曲線,這樣測出的熒光峰才比較準(zhǔn),特別是對于寬峰更要做這個(gè)較準(zhǔn)。
而Raman光譜一般采集的區(qū)域比較窄(指的是波長區(qū)域),一般在窄的波長范圍變化不大,因此一般不考慮儀器本身響應(yīng)曲線誤差,但是Raman光譜來測寬熒光峰,影響就比較大。

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